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解決方案
流式細(xì)胞檢測技術(shù)服務(wù)
點(diǎn)擊次數(shù)：11332 日期：2013/11/8 8:58:46
一、流式細(xì)胞檢測簡介
流式細(xì)胞檢測又稱熒光激活細(xì)胞分選法，一種細(xì)胞分選或分析技術(shù)。即以熒光素標(biāo)記抗體結(jié)合相應(yīng)細(xì)胞，用激光束激發(fā)單行流動(dòng)的細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞所攜帶熒光(強(qiáng)度或類別)進(jìn)行分選或分析。
二、實(shí)驗(yàn)服務(wù)項(xiàng)目
(1)細(xì)胞周期細(xì)胞 （2）細(xì)胞凋亡 (3)免疫細(xì)胞分型 (4)表面抗原鑒定 (5)細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測 (6)線粒體功能 (7)細(xì)胞分選
2、樣本及來源：
1) 單個(gè)細(xì)胞：1~2×106 個(gè)細(xì)胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
2) 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
三、客戶提供
（1）標(biāo)本: 組織、細(xì)胞、全血（抗凝）
（2）抗體（熒光素標(biāo)記）
PE*強(qiáng)，適用于弱表達(dá)抗原
FITC*便宜，適用于強(qiáng)表達(dá)抗原，適用范圍廣
biotin-avidin不適合弱抗原的檢測
（3）其他試劑（如Fluo-3）
（4）染色試劑盒
客戶得到：滿意的流式細(xì)胞儀檢測報(bào)告和實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
四、注意事項(xiàng)：
1、 實(shí)驗(yàn)所用的流式細(xì)胞儀為COULTER EPICS XL。
2、 送檢樣本量：
1)、單個(gè)細(xì)胞：1~2×106 個(gè)細(xì)胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
2)、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
3、 用戶需要進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測時(shí)須提前預(yù)約，同時(shí)說明實(shí)驗(yàn)?zāi)康�、方法等。一次送檢標(biāo)本數(shù)不少于10個(gè)。如果一次送檢標(biāo)本總數(shù)不足10個(gè)，每個(gè)測試費(fèi)用為標(biāo)準(zhǔn)收費(fèi)×2。
4、 本實(shí)驗(yàn)室在正式接受實(shí)驗(yàn)委托一周內(nèi)交付實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所提供實(shí)驗(yàn)結(jié)果忠實(shí)于樣本的實(shí)際情況。
5、 用戶須一次性全額預(yù)付實(shí)驗(yàn)費(fèi)。
6、 部分常用熒光探針，如PI等，我公司可免費(fèi)提供，；特殊標(biāo)記物，如CD抗體等，用戶須另行購買，也可委托我公司代購；用戶所提供抗體應(yīng)可與樣本發(fā)生特異性識(shí)別反應(yīng)。
7、 由用戶提供的樣品或試劑所致的實(shí)驗(yàn)問題由用戶負(fù)責(zé)。
8、 請(qǐng)?jiān)诒碇姓f明檢測具體要求（可另附頁），由于填寫資料不詳所致任何問題由用戶負(fù)責(zé)。
9、 請(qǐng)?jiān)谒蜆拥耐瑫r(shí)提供樣本來源及處理方法等信息，樣品檢測后原則上本公司不負(fù)責(zé)保存。
五、流式細(xì)胞術(shù)檢測樣品推薦制備方法：
A.直接標(biāo)記抗體（FITC標(biāo)記抗體）：
(1)、收集1×106個(gè)細(xì)胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
(2)、用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2mlPBS重懸洗滌細(xì)胞，800rpm離心5min。
(3)、用1ml含5%人血清的PBS重懸細(xì)胞，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清。加入200μl含0.5%BSA和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20μl抗體)的PBS,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200μl1%多聚甲醛固定，待測即可。
(4)、用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10000個(gè)細(xì)胞。
B.未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法：
(1)、收集2×106個(gè)細(xì)胞，用冷的PBS2ml洗滌細(xì)胞一次，800rpm離心5min。
(2)、用2ml4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min；2mlPBS重懸細(xì)胞，800rpm離心5min；
(3)、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞，冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)、加入飽和劑量未標(biāo)記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min，用2ml冷的PBS重懸細(xì)胞，800rpm離心5min，洗去未結(jié)合一抗，重復(fù)一次。
(5)、加入熒光標(biāo)記（FITC）標(biāo)記的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm離心5min，去上清，PBS洗滌兩次。
(6)、加入0.5ml1%多聚甲醛重懸細(xì)胞；固定待測。
(7)、流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10000個(gè)細(xì)胞。
C.細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備：
(1)、待測樣本制成單細(xì)胞懸液，然后2000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，棄上清。
(2)、用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小時(shí)。
(3)、調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升，取1毫升細(xì)胞懸液，用PBS洗三次，細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)、PI染液終濃度為50微克/毫升，RNaseA終濃度為20微克/毫升。
六、如有任何疑問，詳情請(qǐng)電話或 E-mail 咨詢
公司：南京森貝伽生物科技有限公司
電話：025-66915470
傳真： 025-52797049
E-mail：senbeijia@163.com
流式細(xì)胞檢測又稱熒光激活細(xì)胞分選法，一種細(xì)胞分選或分析技術(shù)。即以熒光素標(biāo)記抗體結(jié)合相應(yīng)細(xì)胞，用激光束激發(fā)單行流動(dòng)的細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞所攜帶熒光(強(qiáng)度或類別)進(jìn)行分選或分析。
二、實(shí)驗(yàn)服務(wù)項(xiàng)目
(1)細(xì)胞周期細(xì)胞 （2）細(xì)胞凋亡 (3)免疫細(xì)胞分型 (4)表面抗原鑒定 (5)細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測 (6)線粒體功能 (7)細(xì)胞分選
2、樣本及來源：
1) 單個(gè)細(xì)胞：1~2×106 個(gè)細(xì)胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
2) 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
三、客戶提供
（1）標(biāo)本: 組織、細(xì)胞、全血（抗凝）
（2）抗體（熒光素標(biāo)記）
PE*強(qiáng)，適用于弱表達(dá)抗原
FITC*便宜，適用于強(qiáng)表達(dá)抗原，適用范圍廣
biotin-avidin不適合弱抗原的檢測
（3）其他試劑（如Fluo-3）
（4）染色試劑盒
客戶得到：滿意的流式細(xì)胞儀檢測報(bào)告和實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
四、注意事項(xiàng)：
1、 實(shí)驗(yàn)所用的流式細(xì)胞儀為COULTER EPICS XL。
2、 送檢樣本量：
1)、單個(gè)細(xì)胞：1~2×106 個(gè)細(xì)胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
2)、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
3、 用戶需要進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測時(shí)須提前預(yù)約，同時(shí)說明實(shí)驗(yàn)?zāi)康�、方法等。一次送檢標(biāo)本數(shù)不少于10個(gè)。如果一次送檢標(biāo)本總數(shù)不足10個(gè)，每個(gè)測試費(fèi)用為標(biāo)準(zhǔn)收費(fèi)×2。
4、 本實(shí)驗(yàn)室在正式接受實(shí)驗(yàn)委托一周內(nèi)交付實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所提供實(shí)驗(yàn)結(jié)果忠實(shí)于樣本的實(shí)際情況。
5、 用戶須一次性全額預(yù)付實(shí)驗(yàn)費(fèi)。
6、 部分常用熒光探針，如PI等，我公司可免費(fèi)提供，；特殊標(biāo)記物，如CD抗體等，用戶須另行購買，也可委托我公司代購；用戶所提供抗體應(yīng)可與樣本發(fā)生特異性識(shí)別反應(yīng)。
7、 由用戶提供的樣品或試劑所致的實(shí)驗(yàn)問題由用戶負(fù)責(zé)。
8、 請(qǐng)?jiān)诒碇姓f明檢測具體要求（可另附頁），由于填寫資料不詳所致任何問題由用戶負(fù)責(zé)。
9、 請(qǐng)?jiān)谒蜆拥耐瑫r(shí)提供樣本來源及處理方法等信息，樣品檢測后原則上本公司不負(fù)責(zé)保存。
五、流式細(xì)胞術(shù)檢測樣品推薦制備方法：
A.直接標(biāo)記抗體（FITC標(biāo)記抗體）：
(1)、收集1×106個(gè)細(xì)胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
(2)、用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2mlPBS重懸洗滌細(xì)胞，800rpm離心5min。
(3)、用1ml含5%人血清的PBS重懸細(xì)胞，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清。加入200μl含0.5%BSA和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20μl抗體)的PBS,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200μl1%多聚甲醛固定，待測即可。
(4)、用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10000個(gè)細(xì)胞。
B.未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法：
(1)、收集2×106個(gè)細(xì)胞，用冷的PBS2ml洗滌細(xì)胞一次，800rpm離心5min。
(2)、用2ml4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min；2mlPBS重懸細(xì)胞，800rpm離心5min；
(3)、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞，冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)、加入飽和劑量未標(biāo)記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min，用2ml冷的PBS重懸細(xì)胞，800rpm離心5min，洗去未結(jié)合一抗，重復(fù)一次。
(5)、加入熒光標(biāo)記（FITC）標(biāo)記的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm離心5min，去上清，PBS洗滌兩次。
(6)、加入0.5ml1%多聚甲醛重懸細(xì)胞；固定待測。
(7)、流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10000個(gè)細(xì)胞。
C.細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備：
(1)、待測樣本制成單細(xì)胞懸液，然后2000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，棄上清。
(2)、用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小時(shí)。
(3)、調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升，取1毫升細(xì)胞懸液，用PBS洗三次，細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)、PI染液終濃度為50微克/毫升，RNaseA終濃度為20微克/毫升。
六、如有任何疑問，詳情請(qǐng)電話或 E-mail 咨詢
公司：南京森貝伽生物科技有限公司
電話：025-66915470
傳真： 025-52797049
E-mail：senbeijia@163.com
